熱滅清的原因

  加熱可以滅活補體系統(tǒng).的補體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅清。

  有無必要做熱滅活

  實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的.經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低.而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

  因此建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步.如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的質(zhì)量!

  怎樣避免產(chǎn)生沉淀物

  建議您在使用血清的時候，注意下列的操作:

  解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物:

  § 解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生;

  § 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量;

  § 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟;

  § 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

  → 關(guān)于血清保存凍融要點

  1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃冰箱;

  2)4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月;

  3)由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%，血清在凍入低溫冰箱前必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂;

  4)我公司提供的血清一般為無菌，因此不用再過濾除菌;

  5)如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，不能直接過濾血清;

  6)血清解凍時需采用逐步解凍法，從低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天，然后移入室溫待全部溶解后再分裝;

  7)在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻，注意不要產(chǎn)生氣泡，不要產(chǎn)生沉淀;

  8)不能直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀;

  9)血清滅活是指56℃加熱 30分鐘處理已完全解凍的血清，加熱過程中應(yīng)該搖晃均勻。使血清中的補體成分滅活;

  10)除非必須，商品化血清不需要滅活處理，熱處理會造成血清沉淀物增多;

  11)不能將血清在37℃放置超過2天，血清會變得渾濁，同時降解血清中的有效成分;

  12)血清中的沉淀絮狀物主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清質(zhì)量，3000rpm離心 5分鐘即可去除;

  13)顯微鏡下小黑點是由于經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會增多，有些沉淀物在顯微鏡呈現(xiàn)為黑點，常誤認(rèn)為血清受污染;

  14)通常，黑點不多時不會影響細(xì)胞生長。