隨著科學研究的不斷深入，3D細胞培養(yǎng)的優(yōu)勢日益突出，越來越多的科研工作者將3D細胞培養(yǎng)系統(tǒng)應用于腫瘤生長、藥物研發(fā)、組織修復/再生以及疾病模型等。與體內(nèi)系統(tǒng)相比，3D細胞培養(yǎng)系統(tǒng)在時間和成本上更具有優(yōu)勢，且更加有望于轉(zhuǎn)化到臨床。

然而，尋找到合適的基質(zhì)膠產(chǎn)品并正確使用是推進研究的第一步！

特此我們?yōu)槟占砹擞嘘P基質(zhì)膠產(chǎn)品的問題，并為您作出解答~

如此多版本的基質(zhì)膠該如何選擇？

一、含酚紅or不含酚紅

1、含酚紅基質(zhì)膠:

酚紅可作為pH指示劑，被稀釋于大體積后產(chǎn)品自身的指示作用強度降低；酚紅具有類似雌激素效果，在對激素敏感的研究中不建議使用。

2、不含酚紅基質(zhì)膠:

無顏色干擾，更適用于需染色分析的相關應用：如用熒光染料檢測內(nèi)皮血管生成；培養(yǎng)類器官時盡量使用無酚紅基質(zhì)膠。

二、標準濃度or高濃度

1、標準濃度:

適用于2D和3D細胞培養(yǎng)，如細胞侵襲/遷移實驗，或用于幫助細胞貼壁。

2、高濃度:

常用于體內(nèi)成瘤實驗，可使皮下注射腫瘤細胞固定在原處，形成局部的環(huán)境更利于腫瘤的生長不易被小鼠的免疫系統(tǒng)清除；也適用于血管生成實驗。需要注意的是，基質(zhì)膠終濃度需要達到10mg/mL以上，以促進細胞的附著、分裂和遷移。

三、低因子or標準型

低因子基質(zhì)膠常用于在類器官培養(yǎng)等需要精準分化控制細胞培養(yǎng)場景。

基質(zhì)膠中的細胞因子易引起細胞的不定向分化，甚至凋亡。低因子基質(zhì)膠是在標準型基質(zhì)膠基礎上進行了減生長因子處理，低因子基質(zhì)膠中痕量IGF-1、VEGF、TGF-β、 EGF、 bFGF等生長因子的含量均少于標準型基質(zhì)膠。

四、基質(zhì)膠有什么作用呢？

在基質(zhì)膠的支撐下，細胞可維持3維結(jié)構(gòu)生長，成為一個個三維結(jié)構(gòu)的細胞團。此時基質(zhì)膠會發(fā)揮體內(nèi)基底膜基質(zhì)的作用，代替體內(nèi)細胞基質(zhì)促進細胞生長。加大細胞之間的聯(lián)系，細胞與細胞之間存在相互作用。同時，營養(yǎng)物質(zhì)或者藥物滲透三維細胞團時將受到外圍基質(zhì)膠和細胞阻力形成濃度和滲透梯度。并且它還能模擬體內(nèi)微環(huán)境，誘導細胞的分化和極化。

五、實驗前需要提前多久解凍基質(zhì)膠？

A: 以標準型基質(zhì)膠為例，對于全新未拆封產(chǎn)品，冷凍狀態(tài)下基質(zhì)膠可在使用前一天埋于冰中轉(zhuǎn)移至2-8℃環(huán)境，次日使用；或者在操作前4h暴露于4℃環(huán)境解凍，立刻使用；對于已經(jīng)封裝好的基質(zhì)膠（500 μL為例），冷凍基質(zhì)膠在使用前30min于4℃環(huán)境下解凍即可使用。

六、基質(zhì)膠最低凝膠限度？

建議使用時稀釋濃度不低于4mg/mL，并保證基質(zhì)膠完全溶解于稀釋體系中。

七、基質(zhì)膠鋪板時如何判斷基質(zhì)膠是否已經(jīng)凝固并可進行下一步操作？

標準型濃度的基質(zhì)膠（8-13mg/mL）的凝膠時間約為20-30 分鐘，而高濃度型基質(zhì)膠（16-26mg/mL）凝膠時間約為3分鐘，37℃環(huán)境孵育并確保凝膠時間充足的條件下，可觀察到基質(zhì)膠在底層形成薄層凝膠，即可判斷基質(zhì)膠已經(jīng)凝固。

八、進行一次侵襲實驗需要準備多少基質(zhì)膠呢？

對于24孔板的Transwell小室，建議使用將標準濃度進行1:8稀釋后，以60 μL稀釋液進行鋪膠；我們對于標準型基質(zhì)膠Matrigengel Matrix (Cat.No. 082704)和Matrigengel Matrix (Phenol Red Free)  (Cat.No. 082706)都進行了侵襲驗證，同時提供了不同稀釋比例（1:6和1:4）的腫瘤細胞侵襲效果，可作為實驗參考。

經(jīng)驗證，以不同濃度標準型基質(zhì)膠(Cat. No. 082704)作用24h后，檢測到5×104 SGC-7901的侵襲，且隨著基質(zhì)膠濃度的增 加，成功侵襲的細胞數(shù)明顯減少。

經(jīng)驗證，以不同濃度標準型無酚紅基質(zhì)膠(Cat.No. 082706)作用24h后，檢測到5×104 SGC-7901的侵襲，且隨著基質(zhì)膠濃度的增加，成功侵襲的細胞數(shù)明顯減少。

九、基質(zhì)膠能夠誘導ES/iPSC細胞分化嗎？

誘導分化不取決于基質(zhì)膠，這是由培養(yǎng)基定向分化完成的。Matrigengel Matrix IPSC Level(Cat.No. 082777)可以維持干細胞培養(yǎng)，并保持干性，有利于后續(xù)定向分化。

十、類器官長得越大越好嗎？

不是的，類器官培養(yǎng)過程中需要觀察生長尺寸，并通過傳代等方式控制。由于類器官內(nèi)部缺乏循環(huán)系統(tǒng)，當類器官尺寸較大時，靠近中心的細胞難以和外界進行氧氣和營養(yǎng)成分的交換，容易引起凋亡，不利于后續(xù)檢測。

十一、體內(nèi)成瘤推薦哪一款基質(zhì)膠？

推薦使用Matrigengel Matrix (HC)(Cat. No. 082724), 經(jīng)體內(nèi)成瘤實驗驗證,能顯著促進裸鼠皮下腫瘤增殖。

經(jīng)體內(nèi)成瘤實驗驗證，與對照組和C公司同類產(chǎn)品相比，不同批次的高濃度基質(zhì)膠(Cat. No.082724)能顯著促進裸鼠皮下腫瘤增殖。