THP-1細(xì)胞系是1980年建立的人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系，從一位患有急性單核細(xì)胞白血病的小男孩外周血中分離得到，有分化多種巨噬細(xì)胞的能力，被廣泛應(yīng)用于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的相關(guān)機(jī)制、免疫和炎癥信號(hào)通路等研究。

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1、該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量，凍存時(shí)活細(xì)胞密度不能低于4×106mL，細(xì)胞復(fù)蘇后需要培養(yǎng)5-10天后狀態(tài)才能恢復(fù)，前一周不要進(jìn)行離心操作。

2、該細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時(shí)請(qǐng)注意控制細(xì)胞密度。

3、頻繁的細(xì)胞計(jì)數(shù)是監(jiān)測(cè)THP-1細(xì)胞狀態(tài)的最佳方法。

4、當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×105個(gè)活細(xì)胞/ mL時(shí)需要進(jìn)行傳代。細(xì)胞密度不要超過1×106活細(xì)胞/ mL。

5、該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，在培養(yǎng)時(shí)更喜歡溫和處理，培養(yǎng)時(shí)盡量少對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對(duì)細(xì)胞的傷害。換液時(shí)不要全培養(yǎng)基更換，傳代時(shí)使用半換液法對(duì)細(xì)胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用半換液法進(jìn)行傳代。

6、THP-1細(xì)胞中需要添加β-巰基乙醇，現(xiàn)用現(xiàn)配，不可直接添加至完培中長(zhǎng)期儲(chǔ)存，會(huì)影響β-巰基乙醇的穩(wěn)定性。

7、細(xì)胞傳代后細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)黑色小點(diǎn)，細(xì)胞間隙內(nèi)出現(xiàn)少量顆粒物或者培養(yǎng)基中浮游著少量死細(xì)胞等均為正?，F(xiàn)象，對(duì)細(xì)胞的增殖及試驗(yàn)無影響，不建議頻繁離心，最多一周一次。

培養(yǎng)體系

RPMI-1640培養(yǎng)基（BC-M-017）+20%特級(jí)胎牛血清（BC-SE-FBS01）+1%青霉素-鏈霉素溶液（BC-CE-007）+0.05mMβ-巰基乙醇

Q&A

Q：什么是半換液法？

A：以T25瓶為例，將培養(yǎng)瓶站立靜置5-10min，肉眼可見細(xì)胞沉底，吸2.5mL上清至離心管離心，新鮮培養(yǎng)基重懸后打回原瓶，在原瓶中補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基至5mL。

Tips：THP-1培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基一定要給充足

Q：細(xì)胞貼壁了怎么辦？

A：THP-1培養(yǎng)時(shí)有少量貼壁是正?，F(xiàn)象，建議在傳代時(shí)只吸取上清換瓶培養(yǎng)。或者可以使用不貼壁的無菌培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

Q：細(xì)胞聚團(tuán)了怎么辦？

A：少量聚團(tuán)屬于正?，F(xiàn)象，但較多聚團(tuán)需要注意，檢查培養(yǎng)箱是否正常、培養(yǎng)體系酸堿性以及血清是否合適，適當(dāng)更換血清。