細胞凍存是目前細胞培養(yǎng)中最常見的細胞保存方式。將細胞消化后放置在細胞凍存液中，通過程序降溫盒放置在-80℃超低溫冰箱中過夜后放置在-196℃液氮中凍存，可以讓細胞停止生長從而起到保存細胞特性的效果，再假期結束后再重新復蘇用于實驗，也可以在培養(yǎng)到一定代次后長期凍存一定數量的細胞，保證后續(xù)細胞留種。

細胞凍存一般是我們實驗的最后一步，但是越到最后一步我們越不能掉以輕心，如果凍存步驟出現失誤就會影響到下一代細胞實驗的整體效果，甚至導致細胞提前老化死亡。

那接下來我們就開始好好了解一下細胞凍存這件事兒吧！

液氮保存細胞的原理

細胞是構成生命體的基本結構和功能單位，所以細胞會不斷代謝，代謝過程需要有各類蛋白酶參與，當低于-70℃時蛋白酶就會停止工作，從而通過超低溫貯存就可以使細胞們停止代謝活動，進入休眠狀態(tài)，以便于長期保存。

在細胞凍融中產生的冰晶會對細胞造成損傷，所以我們需要在凍存時加入我們的細胞凍存液（BC-CFM-01-100ML），用科學的力量盡可能的保護我們的細胞。

細胞凍存液（BC-CFM-01-100ML）

細胞需要“慢凍快融”。在細胞凍存時我們需要盡可能地保證細胞的程序降溫。目前常見的操作方法一般分為手動降溫和程序降溫兩種。

手動降溫方法：將細胞凍存管妥善放置在4℃存放30min后放置在-20℃存放60min再次將凍存管存放在-80℃冰箱中過夜，次日移入-178℃液氮中保存。

程序降溫方法：將細胞凍存管放置在容器中，其中填充滿異丙醇，直接放置在-80℃超低溫冰箱中，從而可以保證其內部能夠以-1℃/min的速度進行程序降溫至-80℃，然后轉移至-178℃液氮中儲存。

程序降溫盒可以保證每個梯度的勻速降溫，相較于手動降溫可以更加便捷并且更加精準，如果細胞較脆弱或是較珍貴時建議使用程序降溫盒降溫。

TIPS

注意事項：

1. 全程需嚴格無菌操作；

2. 細胞較脆弱，吹打細胞過程需輕柔；

3. 每次移液后需要更換槍頭，避免造成溶液交叉污染；

4. 胰酶消化時間久會加速細胞老化，需嚴格控制消化時間；

5. 操作液氮時需要做好完全防護措施，避免直接接觸到液氮造成傷害；

6. 細胞凍存液在常溫下具有毒性，細胞凍存管配置好后需要盡快移入冰箱。