胎牛血清-胎牛血清的應用

動物細胞培養(yǎng)技術的發(fā)展極大的推動了現階段生物醫(yī)藥產業(yè)的發(fā)展，此類技術目前被廣泛應用于單克隆抗體的制備、重組蛋白藥物的研發(fā)、人造qi官移植、基因工程等行業(yè)，成為了生物制藥領域的關鍵技術之一。

因為胎牛血清提供了細胞生長所需的貼壁因子、免疫球蛋白、氨基酸、脂肪酸等其他營養(yǎng)成分及細胞因子，為細胞的生長和維持提供了必要的活性成分，并且血清可以提供蛋白抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害，對細胞培養(yǎng)的意義重大。

無論是在單克隆抗體、ADC、細胞免疫zhi療或者是疫苗生產過程中都會用到胎牛血清培養(yǎng)細胞，以常見的293T細胞培養(yǎng)為例。其作為哺乳類細胞的篩選以及穩(wěn)定性表達細胞系，廣泛應用于生物醫(yī)藥各個方面，森貝伽生物研發(fā)部門對于293T細胞培育至15代，并篩選出較適用的培育方案。

1、培養(yǎng)條件

RPMI 1640培養(yǎng)基（BC-M-017-500mL） + 10% Fetal Bovine Serum（BC-SE-FBS01-500mL）

2、細胞復蘇

將含有1ml細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5ml培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補加4-6ml完全培養(yǎng)基吹勻。然后將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中過夜，第二天檢查細胞密度并換液。

3、細胞傳代

當細胞鏡下觀察匯合度達到80%-90%時，即可進行傳代培養(yǎng)。棄去培養(yǎng)液上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞2次。加1-2ml胰酶消化液（0.05%Trypsin-EDTA）（BC-CE-001-100mL）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，鏡下觀察細胞大部分圓縮并脫落，肉眼觀察細胞培養(yǎng)瓶上部細胞呈掛線狀滑落，迅速拿回操作臺，于手心輕敲幾下培養(yǎng)瓶，可見細胞呈沙粒狀滑落，加5ml以上完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕吹打細胞，完全脫落分散后吸出，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補加1-2ml吹勻。按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞重懸按1：2到1：4的比例分到新的培養(yǎng)瓶中。放入37℃、5%CO2細胞培養(yǎng)箱中，傳代結束。

注：

不同的環(huán)境下的細胞可能會相對的誤差才會達到Z適條件，尤其是干細胞和原代細胞，會需要客戶根據自己的需求來進行微調，以保證培養(yǎng)的Z終效果。

杭州昊鑫生物/胎牛血清/細胞培養(yǎng)

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