MCF-7(人乳腺癌細胞)培養(yǎng)建議

細胞介紹

英文名稱：MCF-7

中文名稱：人乳腺癌細胞

種  屬：人源

組織來源：乳腺，乳房；源自轉(zhuǎn)移部位：胸腔積液

生長特性：貼壁生長（胰酶會刺激分化）

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代比例：1:2 ~ 1:3

換液頻率：2~3次/周

倍增時間：30-72h

培養(yǎng)體系：MEM（含NEAA）+10% Bio-channel特級胎牛血清+1% P/S

培養(yǎng)條件：5% CO2 ；37 ℃

凍存條件：Biochannel 細胞凍存液，程序降溫，液氮長期保存。




培養(yǎng)建議


細胞培養(yǎng)特點

1. MCF-7細胞一般情況下是生長緩慢的細胞系，前期呈島狀生長，隨著細胞生長，細胞會逐步變成扁平單層細胞。通常需要6~12天才能達到80%生長密度，如果生長速度比正常情況還要緩慢，可能需要換另外批次的血清，把血清濃度提高到20%也有助于改善細胞生長情況。

2. 細胞在復蘇和傳代后，會在培養(yǎng)基中觀察到成團的細胞漂浮物，對于這個細胞來說這是正常的情況，在復蘇和傳代后前三天可以靜置細胞不做處理，三天后貼壁情況會有所改善，但懸浮的細胞團仍會出現(xiàn)，這些懸浮的細胞是活細胞在換液和傳代時需要離心回收，這些懸浮細胞團可以通過使用移液器（5mL或者更?。﹣泶瞪?，重新打入到貼壁細胞培養(yǎng)瓶中。丟棄這些懸浮細胞會使細胞密度變低，細胞生長緩慢。

3. 使用BC-CE-005   胰酶-EDTA消化液（0.25%胰酶，含酚紅） 消化細胞。

4. 細胞消化較快，室溫消化即可；消化時不要通過敲擊或搖晃培養(yǎng)瓶來攪動細胞，以免形成細胞團。




細胞培養(yǎng)注意事項

1. 建議加入胰島素培養(yǎng)；

2. MCF-7細胞細胞貼壁較慢，處理后48h后再觀察較好。MCF-7剛復蘇時長得很慢很慢，主要看貼壁的細胞是不是已經(jīng)舒展開來（三角形或多邊形），其次，看貼壁細胞是否開始分裂，形成一個一個的細胞群（MCF-7具上皮細胞的性質(zhì)）。如果開始增殖，就是好現(xiàn)象?；謴秃?，會長得快一點，但和其他的乳腺癌細胞沒得比，還是不快，傳代時比例不要太大。還有，這個細胞恢復時貼壁比較慢，但貼得很牢，消化時胰酶處理要適合，免得大量的細胞仍在皿上不下來。

3. 要注意MCF-7人乳腺癌細胞是一種腫瘤細胞，生長規(guī)律性差，很容易不均勻，要注意吹打的充分性。


MCF-7細胞特點

1. 成團簇的形式生長；

2. 由于MCF-7細胞是三維團簇的方式生長，復蘇和傳代后會重新附著為三維島（會有一些不會重新附著的簇）。生長最終會從島嶼狀慢慢擴散開來，隨著時間的推移，細胞會緩慢變成單層，這個時候細胞基本處于對數(shù)生長期。

3. MCF-7人乳腺癌細胞是一種本身生長緩慢的細胞，當細胞培養(yǎng)至細胞 70~80% 的匯合度，即可進行分瓶處理，一般T25培養(yǎng)瓶建議1:2傳代，每周可傳代2~3次，如果細胞生長速度比正常的時候更慢，可以適當提高血清到20%有利于促進生長。

4. MCF-7細胞在復蘇、傳代后，細胞會有一些漂浮狀態(tài)，這些漂浮細胞是正?，F(xiàn)象，可以視為混合的貼壁和懸浮細胞系。一般復蘇、傳代培養(yǎng)3天后漂浮細胞會再繼續(xù)粘附貼壁。直到生長從島嶼擴散開來并且在培養(yǎng)瓶內(nèi)伸展開，通常在進行換液的時候我們會補加培養(yǎng)基，如果一定要全換液，可以通過離心收集懸浮細胞以1000轉(zhuǎn)5min，并將懸浮細胞接種到新培養(yǎng)瓶。

5. MCF-7細胞密度低時，生長緩慢，接種密度建議啟動接種密度：8.0×104至 1.5×105 活細胞/cm2為宜，繼代培養(yǎng)的接種密度：4.0 ×104至 1.0×105 活細胞/cm2。


常見問題

Q: 收貨時細胞出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦？

A：受到運輸影響，懸浮細胞會短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象，如偽足等。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復正常。一些細胞在運輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過傳代離心可以去除（見上文傳代篇）。


Q：培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦？

A: 少量細胞貼壁屬于正常情況，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當貼壁細胞的比例高于20%，說明細胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。


Q：培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦？

A：少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正?，F(xiàn)象，特別是細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。


Q：培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

A：β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時，可適當增加巰基乙醇的比例（不超過標準量的1.5倍）。


Q：鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦？

A：懸浮細胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10min使細胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細胞密度。