細(xì)胞概述

HacaT（人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞），該細(xì)胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚，角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽性。

細(xì)胞培養(yǎng)條件

細(xì)胞培養(yǎng)建議

1、細(xì)胞復(fù)蘇

將含有1ml細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5ml培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補(bǔ)加4-6ml完全培養(yǎng)基吹勻。然后將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中過夜，第二天檢查細(xì)胞密度并換液。

2、細(xì)胞傳代

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

棄去培養(yǎng)液上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細(xì)胞2次。

加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-EDTA）BC-CE-005于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化3-5min，鏡下觀察細(xì)胞大部分圓縮并脫落，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶上部細(xì)胞呈掛線狀滑落，迅速拿回操作臺(tái)，于手心輕敲幾下培養(yǎng)瓶，可見細(xì)胞呈沙粒狀滑落，加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落分散后吸出，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml吹勻

按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞重懸按1：2到1：3的比例分到新的培養(yǎng)瓶中。

細(xì)胞圖片

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